您現(xiàn)在的位置：中國(guó)農(nóng)業(yè)儀器網(wǎng) > 技術(shù)文章 > 粗脂肪酶活力的測(cè)定方法的研究

粗脂肪酶活力的測(cè)定方法的研究

來源：本站　類別：技術(shù)文章　更新時(shí)間：2010-06-19　閱讀次

脂肪酶又稱甘油酯水解酶, 它能催化甘油三酯水解生成甘油二酯或甘油一酯或甘油和脂肪酸。粗脂肪酶由于保存不當(dāng)或放置時(shí)間較長(zhǎng), 常常會(huì)使活力下降, 因此, 使用時(shí)必須對(duì)粗脂肪酶活力進(jìn)行測(cè)定。檢測(cè)脂肪酶活力的方法有很多種, 所使用的底物也很多, 各有優(yōu)缺點(diǎn)。目前為止, 還沒有一種統(tǒng)一的檢測(cè)手段, 各生產(chǎn)廠家和科研部門通常根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)條件來制定各自的檢測(cè)方法。反映脂肪分解程度的指標(biāo)有酸價(jià)、碘價(jià)、皂化價(jià)、過氧化值等。本實(shí)驗(yàn)用酸價(jià)作指標(biāo), 用95%乙醇作終止劑, 通過酸價(jià)的測(cè)定反映脂肪酶分解脂肪的程度, 從而求得酶活力。旨在探討一種新的快速的測(cè)定粗脂肪酶活力的一種方法。

1　材料與方法

1.1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1　食用色拉油: 市售

1.1.2　生物試劑

粗脂肪酶，標(biāo)準(zhǔn)脂肪酶；

1.1.3　化學(xué)試劑

酚酞指示劑95%乙醇溶液0105 mol/LNaOH溶液

1.1.4　主要儀器設(shè)備

電熱恒溫水浴鍋　微量滴定管　電子天平 SZF-06A粗脂肪測(cè)定儀纖維測(cè)定儀

1.2　方　　法

1.2.1　粗酶液的制備

用電子天平分別稱取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g, 用蒸餾水溶解并定容至100 mL, 配成濃度分別為0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。

1.2.2　實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

本實(shí)驗(yàn)以10 mL色拉油為底物,以酶用量、水解溫度、反應(yīng)時(shí)間為因素,通過酸價(jià)的測(cè)定選定其水解的最佳條件。正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1和表2。

1.2.3　酸價(jià)的測(cè)定

酸價(jià)是指中和1 mol游離脂肪酸所需NaOH的毫克數(shù), 它用于衡量油脂的水解程度。實(shí)驗(yàn)中用酸堿滴定法測(cè)定水解液的酸價(jià), 參照文獻(xiàn)中所使用的方法, 向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液, 搖勻, 終止反應(yīng), 并加入2滴酚酞指示劑, 迅速用0105 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微紅色, 在30 s內(nèi)不消失為終點(diǎn), 記錄消耗的NaOH溶液毫升數(shù)(V ) 。用同樣的方法測(cè)定空白值, 每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)兩次, 以平均值作為測(cè)定結(jié)果。

酸價(jià)按下式計(jì)算:

X = C (V - V0 ) ×40 /M

式中: X —油脂酸價(jià)(mgNaOH /g油)

C—NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度(mol/L)

M —試樣的質(zhì)量( g)

40—NaOH的mmol質(zhì)量(mg/mmol)

1.2.4　粗脂肪酶活力的測(cè)定

在最佳水解條件下, 分別測(cè)得粗脂肪酶和標(biāo)準(zhǔn)脂肪酶水解液的酸價(jià)X1、X2 , 根據(jù)公式U1 /U= X1 / X2求得粗脂肪酶的活力, 其中U1為粗脂肪酶活力, U為標(biāo)準(zhǔn)脂肪酶活力。

1. 2. 5　標(biāo)準(zhǔn)脂肪酶液的配制

根據(jù)實(shí)驗(yàn)最佳條件, 配制標(biāo)準(zhǔn)脂肪酶液。

2　結(jié)果與分析

2.1　最佳水解條件的選定

　　試驗(yàn)結(jié)果見表3。

從表3中直觀分析(極差分析) 即R值的大小可以看出, 在試驗(yàn)所選因素的水平范圍內(nèi), 各因素對(duì)水解程度的影響大小順序?yàn)? 水解溫度>酶用量>反應(yīng)時(shí)間; 試驗(yàn)最佳條件為C1A2B1 , 即水解溫度37℃, 酶用量0102% , 反應(yīng)時(shí)間20 min。

2.2　粗脂肪酶活力的測(cè)定結(jié)果

分別測(cè)得X1、X2 為0.07 mgNaOH /g 油、1.2675 mgNaOH /g油, 代入公式計(jì)算得粗脂肪酶活力為: 99.4 U /mg。

所購(gòu)粗脂肪酶活力是100 U /mg, 在冰箱保存半年后, 酶活力有一定程度的下降, 本法測(cè)定結(jié)果為99.4 U /mg, 略低于原來酶的活力, 這是由于酶活力下降引起, 屬正常范圍, 可見使用本法可行。

3　結(jié)　　論

此法可用于粗脂肪酶活力的測(cè)定, 且最佳酶促水解反應(yīng)條件為: 酶用量0.02% , 反應(yīng)時(shí)間20 min, 水解溫度37℃。

【中國(guó)農(nóng)業(yè)儀器網(wǎng)】聲明部分文章轉(zhuǎn)載自其它媒體，轉(zhuǎn)載目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，且不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)和其它問題，請(qǐng)?jiān)?0日內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系。